冰箱细菌培养方法_冰箱细菌培养方法视频

       大家好，今天我想和大家探讨一下“冰箱细菌培养方法”的应用场景。为了让大家更好地理解这个问题，我将相关资料进行了分类，现在就让我们一起来探讨吧。

1.大肠杆菌的检测方法

2.微生物挑战性试验怎么做？

3.急！！！！！！！！！在什么样品中能提取大肠杆菌（要实用的）！！！！！！！！！！！

冰箱细菌培养方法_冰箱细菌培养方法视频

大肠杆菌的检测方法

       多管发酵法。

       多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法，这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h，而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶，从而释放出荧光产物，进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。

       在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵，分离培养试验，利用伊红美蓝培养皿分离，接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵，最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。

扩展资料：

       注意事项：

       1、检样时注意无菌操作。

       2、稀释时采用的稀释液可以用磷酸盐缓冲液或生理盐水，接种时可采用九管法，设置三个梯度，分别为0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一个稀释度的试管应充分混匀。

       3、每次实验需要有阴性对照。

       4、使用小倒管培养基配制时，为排净气泡，灭菌时不要把试管的盖子盖的太紧，灭菌后注意观察一下倒管中的气体是否排完全、

       5、高压灭菌后等高压灭菌锅的压力表达到0，取出培养基放到冰箱冷却，效果会比较好。

       百度百科-大肠杆菌测试片

       百度百科-大肠杆菌

微生物挑战性试验怎么做？

       大肠埃希氏菌多管发酵法 (multiple tube fermentaion technique for escherichia coli) 是指多管发酵法总大肠菌群阳性，在含有荧光底物的培养基上44.5℃培养24h 产生 β-葡萄糖醛酶 (β-glucuronidase) ，分解荧光底物释放出荧光产物，使培养基在紫外光下产生特征性荧光的细菌，以此来检测水中大肠埃希氏菌的方法。

       装置

       紫外光灯 6W、波长 366nm 的紫外灯，用于观测荧光反应。

       培养箱 (36 ±1) ℃。

       平皿 直径为 9cm。

       试管。

       分度吸管 1mL，10mL。

       锥形瓶。

       小倒管。

       金属接种环。

       冰箱 0～4℃。

       培养基与试剂

       EC-MUG 培养基

       成分: 胰蛋白胨 20.0g、乳糖5.0g、3 号胆盐或混合胆盐1.5g、磷酸氢二钾4.0g、磷酸二氢钾 1.5g、氯化钠 5.0g、4-甲基伞形酮-β-D 葡萄糖醛酸苷 (MUG) 0.05g。

       制法: 将干燥成分加入水中，充分混匀，加热溶解，在 366nm 紫外光下检查无自发荧光后分装于试管中，68.95kPa (115℃) 高压灭菌 20min，最终 pH 为 6.9 ±0.2。

       检验步骤

       1) 接种。将总大肠菌群多管发酵法初发酵产酸或产气的管进行大肠埃希氏菌检测。用烧灼灭菌的金属接种环或无菌棉签将上述试管中液体接种到 EC-MUG 管中。

       2) 培养。将已接种的 EC-MUG 管在培养箱或恒温水浴中 (44.5 ± 0.5) ℃ 培养 (24 ±2) h。如使用恒温水浴，在接种后 30min 内进行培养，使水浴的液面超过 EC-MUG 管的液面。

       结果观察与报告

       将培养后的 EC-MUG 管在暗处用波长为 366nm 功率为 6W 的紫外光灯照射，如果有蓝色荧光产生则表示水样中含有埃希氏菌。

       计算 EC-MUG 阳性管数，查对应的最可能数 (MPN) 表得出大肠埃希菌的最可能数，结果以 MPN/100mL 报告。

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       防腐体系效能挑战实验

       1、CTFA推荐的防腐单次挑战试验

       CTFA推荐的经典的为期28天的防腐单次挑战实验，是将防腐剂混入配方基质中，然后一次性接入若干种类、一定数量的微生物进行挑战，将样品存放于适当的温度下，定期抽样检测其中残存的微生物，并根据微生物的数量变化情况评价样品的抗菌效果。

       2、试验仪器

       恒温培养箱、显微镜、灭菌平皿：直径为9cm、pH计、高压灭菌锅、酒精灯、锥形烧瓶、量筒、灭菌刻度吸管：10ml、2ml、1ml;试管。

       3、培养基和试剂

        生理盐水、SCDLP液体培养基、卵磷脂、吐温80-营养培养基。

       4、挑战用微生物

       提取菌珠：杂菌由实验室从污染产品中得出菌种。

       菌种培养：实验前，将各菌种接种于合适的培养基中，于37℃（细菌）培养箱中培养。细菌培养48小时，挑选典型的菌落于灭菌的液体培养基中制成一定浓度的细菌和霉菌混合悬液，置于冰箱冷藏备用。

       5、微生物挑战实验

        称取8种化妆品基质样品各100克，加入灭菌的容器内，加入混合细菌悬液，充分混匀。每克样品含细菌量为5×106CFU/克或CFU/ml。然后置于28℃下。在接菌的0、7、14、21、28天取样分析：准确称取10克样品，加到含有玻璃小球和90ml灭菌生理盐水的锥形瓶内，充分震荡混匀，此悬液为1：10稀释液；然后再用生理盐水按1：10依次稀释。按平板倾注法计数样品中含菌量细菌培养37℃下48小时。

       6、判定标准

       1、第28天时，样品中含细菌>103cfu/g(ml)，该样品不能通过微生物攻击的挑战性实验，表明样品的防腐体系不能有效地起到抑制微生物的作用，产品在生产、贮藏和使用中很容易受到微生物的污染。

        2、第28天时，样品中含细菌在102cfu/g(ml)-103cfu/g(ml)，该样品有条件地通过挑战性实验，即当产品中蛋白质或其它动植物材料成分不是特别高，同时生产的卫生环境符合要求，包装物不易发生二次污染时，该防腐体系可以使用，否则不能。

       3、第28天，样品中含细菌在10cfu/g(ml)-102cfu/g(ml)，表明该样品的防腐体系对微生物有较强的抑杀效果，通过挑战试验，产品在生产、贮藏和使用时不容易受到微生物污染。

        4、从第7天起，样品中的细菌

       1.在人或动物的肠道中得到.

       2.我们实验室用的是沙土法保藏菌种,一般可保藏3-4年

       3.应多保藏纯化第一代的细菌,如楼上所说菌种有复壮的特性,是因为所培养的培养基无法与原来菌生长环境所需养分相同,导致菌变性,或衰退,是正常现象.

       好了，今天关于“冰箱细菌培养方法”的探讨就到这里了。希望大家能够对“冰箱细菌培养方法”有更深入的认识，并且从我的回答中得到一些帮助。